در روش پورپلیت که یک روش آزمایشگاهی برای کشت باکتری‌ها است و کاربردی گسترده در آزمایشگاه‌های باکتریولوژی دارد، توسط یک فرد به نام رابرد کخ ابداع شد. برای نمونه‌هایی که دارای یک جمعیت میکروبی و مخلوطی از انواع سلول‌ها هستند روش پورپلیت برای تولید یک کشت خالص از میکروارگانیسم‌های موجود در این جمعیت میکروبی استفاده می‌کنند. به طور کلی هدف اصلی از انجام دادن روش پورپلیت جدا کردن یک کشت خالص از مخلوطی از جمعیت‌های میکروبی مختلف و نشان دادن مشخصات باکتری‌ها از جمله رنگ،: بافت، اندازه، ارتفاع و … است. روش پورپلیت برای شمارش تعداد موجودات زنده در مایعاتی مانند آب، شیر، ادرار و یا کشت آبگوشت و همچنین تعیین فعالیت‌های همولیتیک کلنی‌های عمیق برخی باکتری‌ها مانند استرپتوکوک کاربرد دارد.تفاوت روش پورپلیت و کشت سطحی در شمارش باکتری‌ها است، که در روش پورپلیت شمارش باکتری‌ها دقیق‌تر از روش کشت خطی است. اما در روش پورپلیت به طور متوسط میزان شمارش کمتری از باکتری‌ها ارائه می‌شود زیرا میکروارگانیسم‌هایی که به گرما حساس هستند در تماس با محیط گرم و آگار مذاب ممکن است از بین بروند.
تفاوت کشت سطحی و پورپلیت چیست
تکنیک پورپلیت چیست؟
تکنیک پورپلیت یک روش پرکاربرد در بسیاری از آزمایشگاه‌ها به ویژه آزمایشگاه‌های داروسازی، بالینی و صنایع غذایی است. در روش پورپلیت برای شمارش تعداد باکتری‌های خاصی که در یک نمونه موجود هست، استفاده می‌کنند.
برای انجام تکنیک پور پلیت به چه ابزارهایی نیاز داریم؟
در تکنیک پور پلیت از پلیت، لوله آزمایش، پیپت 1 سی سی، سرم فیزیولوژی، محیط کشت PCA، دستگاه کلونی کانتر، انکوباتور و نمونه ماده غذایی مورد استفاده قرار می‌گیرد.
تفاوت کشت سطحی و پورپلیت چیست
روش انجام کار در تکنیک پور پلیت چگونه است؟
در روش کشت به روش پورپلیت برای شناسایی و تشخیص باکتری‌های اشرشیا کلی، یک میلی لیتر از نمونه آب را به لوله برلیانت گرین براث، که دارای لوله دورهام است اضافه کرده و 1 سی سی از نمونه آب را در یک پلیت خالی می‌ریزیم و با استفاده از محیط کشت مک کانگی آگار به صورت پورپلیت دو لایه کشت داده می‌شود. پس از بسته شدن محیط برای کشت به روش پورپلیت آن را به همراه لوله برلیانت گرین براث در دمای 37 درجه سانتی‌گراد برای مدت 24 تا 48 ساعت گرماگذاری گردید.
تفاوت کشت سطحی و پورپلیت چیست
مراحل انجام کشت در روش پورپلیت چگونه است؟
در مرحله اول انجام کشت در این روش در اطراف پتری دیش استریل یا کف آن یک لیبل که حاوی نام آزمونگر، تاریخ انجام آزمایش، نوع محیط کشت و نوع ارگانیسم‌هایی که باید به آگار ذوب شده اضافه کنید را بچسبانید. دقت کنید که نباید لیبل را بر روی درب پتری دیش بچسبانید.
سپس در مرحله دوم ممکن است نیاز به تهیه رقت‌های سریالی برای کشت باکتری‌ها داشته باشید که منجر به کاهش سیستماتیک غلظت سلول‌ها در نمونه می‌شود. آماده‌سازی رقت‌های سریالی زمانی نیاز است که تعداد سلول‌های حاوی نمونه بیشتر از ظرفیت پتری دیش حاوی آگار باشد. ظرفیت آنها معمولا با واحد CFU سنجیده می‌شود و عددی بین 30 تا 300 CFU را نشان می‌دهد. اگر تعداد سلول‌های نمونه بیشتر از 300 CFU تخمین زده شود، کلنی‌ها با هم تداخل خواهد داشت. سپس یک لوله حاوی 18 میلی لیتر آگار ذوب شده را تهیه کنید. آگار محیط کشت باید از قبل در اتوکلاو استریل شده باشد و سپس در لوله‌های آزمایشگاهی توزیع شود.
تفاوت کشت سطحی و پورپلیت چیست
دقت کنید که آگار را باید در همان زمانی آماده کنید که قصد انجام کار با آن را دارید. آگار باید قبل از انجام کار به مدت 30 دقیقه در اتوکلاو قرار گیرد تا کاملا استریل شود. سپس باید محیط کشت آگار را به حمام آب 55 درجه سانتی‌گراد انتقال دهید. آگاری که به این صورت ذوب شود دیگر قابل استفاده نیست، بنابراین باید آن را به مقداری که نیاز دارید تهیه کنید.
ده دقیقه قبل از ریختن آگار ذوب شده در پتری دیش آگار ذوب شده را از حمام آب با دمای 55 درجه سانتی‌گراد در بیاورید و بگذارید تا به دمای 48 درجه سانتی‌گراد برسد. زمانی که آگار به دمای 48 درجه سانتی‌گراد رسید آماده ریخته شدن در پلیت است. اگر آگار بیش از اندازه گرم باشد ممکن است باکتری‌ها زمانی که بر روی آن ریخته می‌شوند از بین بروند. همچنین اگر آگار بیش از اندازه خنک باشد ممکن است در حین جامد شدن گلوله گلوله شود.
تفاوت کشت سطحی و پورپلیت چیست
لوله دارای نمونه موردنظر خود را بردارید. نمونه موردنظر باید به صورت یک کشت آبگوشت یا سوسپانسیون سلولی باشد که با مخلوط کردن سلول‌ها در بافر یا سالین تولید می‌شود. در صورت نیاز از رقت‌های سریالی استفاده کنید.
در این مرحله باید درب پتری دیش را باز کنید و نمونه خود را به کمک پیپت سرولوژی یا سمپلر در وسط ظرف پخش کنید و در آن را ببندید. جریان نمونه را کنترل کنید تا از پتری دیش بیرون ریخته نشود. نکته‌ای که باید به آن دقت کنید این است که در حین انجام آزمایش باید از تکنیک‌های آسپتیک استفاده کنید. درپوش لوله‌ای که دارای آگار ذوب شده است را بردارید و لبه لوله را با استفاده از چراغ بنزن حرارت دهید. درب ظرفی که حاوی نمونه است را باز کنید و آگار را با دقت در آن بریزید و سپس درب ظرف را ببندید و با چرخاندن آرام پتری دیش نمونه را با آگار کاملا مخلوط کنید. سپس اجازه دهید که آگار کاملا جامد شود. در مرحله آخر باید پتری دیش را به شکلی وارونه درون انکوباتور 37 درجه سانتی‌گراد قرار دهید.
تفاوت کشت سطحی و پورپلیت چیست
هدف از انجام کشت پورپلیت چیست؟
هدف انجام روش کشت پورپلیت جدا کردن یک کشت خالص از مخلوطی از جمعیت‌های میکروبی مختلف است و نشان دادن مشخصات باکتری‌ها از جمله رنگ، بافت، اندازه و ارتفاع و … است.
تفاوت کشت سطحی و کشت پورپلیت در چیست؟
در کشت سطحی از محیط پیش ریخته استفاده می‌شود که برای محیط‌های مایع میکروبی بسیار کاربرد دارد. روش کشت سطحی بیشتر برای محیط‌های مایع میکروبی کاربرد دارد و یا اگر محیط مایعی مانند شیر مشکوک به آلودگی میکروبی باشد می‌توان آن را با روش کشت میکروبی آنالیز کرد و میکروارگانیسم‌های موجود در آن را مشخص کرد.
تفاوت کشت سطحی و پورپلیت چیست
نتیجه گیری
روش‌های کشت سطحی و پورپلیت که در انواع آزمایشگاه‌های میکروبی، شیمیایی و … استفاده می‌شود. در روش پورپلیت ابتدا باید محیط آگار را آماده‌سازی کرد و آن را در اتوکلاو گذاشت و سپس از آن برای رشد میکروبی استفاده کرد؛ اما در روش کشت سطحی از محیط کشت‌هایی که قبلا آماده شده است، استفاده می‌کنند.
ثبت ديدگاه